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革蘭氏染色的方法
源葉生物 / 2015-05-08

       細菌先經堿性染料結晶紫染色,再經碘液媒染(以增加染料與細胞的親和力)后,用酒精或丙酮脫色,再用復染色劑染色。不被脫色而保持原顏色者為革蘭紙陽性菌(G+);被脫色后又被染上復染劑的顏色者為革蘭氏陽性菌(G-)。此法可將細菌分為兩大類。
    革蘭氏染色的機理主要是利用兩類細菌的細胞壁成分和結構不同。革蘭氏陰性菌的細胞壁中含有較多的類脂質,而肽聚糖的含量較少。當用乙醇或丙酮脫色時,類脂質被溶解,增加了細胞壁的通透性,使初染后的結晶紫和碘的復合物易于滲出,結果細胞被脫色,經復染后,又染上復染液的顏色;而革蘭氏陽性菌細胞壁中肽聚糖的含量多且交聯度大,類脂質含量少,經乙醇或丙酮洗脫后,肽聚糖層的孔徑變小,通透性降低,因此,細胞仍保留初染時的顏色。

【實驗材料、藥品及器具】
   1、菌種:大腸桿菌(Escherichia coli),枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis),金黃色葡萄球菌(Staphylococeus auresu)
   2、染液:草酸銨結晶紫液,革蘭氏碘液,95%的酒精,藏花紅液
   3、器皿洗凈的載玻片6片、顯微鏡、酒精燈、接種環、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、鑷子、玻璃缸、瓶裝蒸餾水
【實驗步驟】
   1、取培養12-24h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌分別涂片、固定。
   2、加草酸銨結晶紫染色劑一滴,染色1分鐘。
   3、傾去染液并用洗瓶裝水輕輕沖洗。
   4、加碘液染1分鐘,水洗,然后用吸水紙吸干。
5、將載玻片略傾斜,滴加95%酒精脫色(洗至流下的酒精中無紫色時為止),然后水洗。
6、加藏花紅復染,染色30分鐘,水洗,用吸水紙吸干或烘干。
7、用油鏡鏡檢觀察。

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